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凍存過的全血為什么不建議再拿來做ELISA實驗?
很多ELISA實驗新手客戶都會咨詢我司技術(shù)能否把全血提取出來放-70℃條件保存，等實驗開展了(比如一個月左右的時間)再離心全血取血清或者血漿做ELISA實驗?這種做法我司技術(shù)都是持反對建議的。與此同時，也是明確要求我司銷售人員在與客戶售前溝通時建議老師全血樣本提取好了應該及時離心出血清或者血漿。并要求-70℃條件下保存，如果一個月左右可以開展實驗可以-20℃保存，期間不能反復凍融。至于凍存后的全血不可以再提取血清、血漿樣本來做elisa的具體原因如下：
1.全血凍存后解凍，用常規(guī)離心方式提取血清仍然是可以的，不利的一點是，伴隨凍融的過程，會出現(xiàn)比較嚴重的溶血事件。而后提取出來的血清能否做elisa，主要取決于溶血程度、你所要檢測的目標蛋白的性質(zhì)及你實驗的目的。
2.溶血釋放的胞內(nèi)組分往往容易影響本底，甚至出現(xiàn)假陽性;而蛋白酶的釋放可能導致目的蛋白的降解影響結(jié)果;目的蛋白的大小、穩(wěn)定性、特異性(相對抗體而言)又影響其自身與酶標板的吸附、自身降解、自身與抗體的結(jié)合率等等。以上各種不確定性因素存在下，如果你只是對血清中某種血清蛋白做定性檢測的話，做elisa應該問題不大;若是定量分析的話，從可靠性的角度上看，不建議該做法。
elisa試劑盒需求多少血樣?
1.請問每孔需求多少ul血清，其他，比如說需求100ul血清，那么需求留取多少人抗凝血呢?一般常用的ELISA試劑盒有96孔，根據(jù)試驗需求做復孔，陰性、陽性對照組。復孔一般設3孔。
2.試驗都是取5ML的抗凝血離心后取血清，能夠得到許多血清。然后分裝到EP管凍存，然后取一部分來做ELISA試劑盒，其他的做其他試驗用。
3.需求的樣本量取決于你的檢查項目,有些檢查項目需求血清做1:100稀釋,乃至是更高的稀釋度,那么幾微升血樣就夠了,有些項目只能做較低的稀釋,乃至不稀釋,這么的話每孔會需求100ul分配.
關(guān)于抗凝血和得到的聯(lián)絡,大致上份額是1毫升全血能夠得到500ul血清或血漿.我血樣是現(xiàn)已把細胞分離出來了的,現(xiàn)要提DNA,試劑盒上說"取0.3-0.5ml全血到1ml純化樹脂中",應取多少μl細胞?
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